環(huán)己基氨基磺酸鈉俗稱“甜蜜素”,有些企業(yè)為調(diào)節(jié)口感而違規(guī)添加甜蜜素或添加含有甜蜜素的復(fù)合調(diào)酒劑,給消費者的健康帶來了極大的隱患。
山東譜析儀器色譜技術(shù)人員針對國標(biāo)方法,對樣品前處理方法進(jìn)行改進(jìn),以消除相應(yīng)的影響因素并對氣相色譜儀分析條件進(jìn)行優(yōu)化,降低方法的檢出限。與液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行了比對試驗,證明該方法測定結(jié)果可靠,操作簡便,易于推廣。
1. 分析部分
1.1 主要儀器與試劑
國產(chǎn)氣相色譜儀:譜析GC-17型,配有FID檢測器,10μL微量進(jìn)樣器;電子分析天平:FA2004B型;
白酒樣品:實驗室抽檢樣品;甜蜜素(環(huán)己基氨基磺酸鈉)標(biāo)準(zhǔn)品:純度不低于98%;
環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:1mg/mL,精確稱取0.1000g環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品,加入水溶解并定容至100mL,搖勻;正己烷、氯化鈉:分析純;硫酸溶液:100g/L,分析純;亞硝酸鈉溶液:50g/L,分析純;所用試劑除特殊說明外均為分析純;實驗用水為去離子水。
1.2 儀器工作條件
毛細(xì)管色譜柱:HP–INNOWAX柱(30m×0.32mm×0.25μm);進(jìn)樣口溫度:180℃;檢測器溫度:220℃;程序升溫:初始溫度50℃,保持7min,以50℃/min升至200℃,保持1min;載氣:氮氣;流速:2.0mL/min;氫氣流量:mL/min;空氣流量:300mL/min;尾吹氣流量:25mL/min;進(jìn)樣量:1μL;分流比:5∶1;保留時間定性,峰面積定量。
1.3 實驗方法
1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液處理和測定
分別準(zhǔn)確吸取0.00,0.10,0.20,0.40,0.80,1.00,2.00mL環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于7個25mL具塞比色管中,加水至10mL置冰浴中,加入2.5mL50g/L亞硝酸鈉及2.5mL100g/L硫酸溶液,搖勻,在冰浴中放置30min,并經(jīng)常搖動,然后準(zhǔn)確加入5mL正己烷、2.5g氯化鈉,振搖100次,分層后取正己烷層進(jìn)樣1μL進(jìn)行色譜分析。對應(yīng)各點的濃度分別為0.00,0.02,0.04,0.08,0.16,0.20,0.40g/L,根據(jù)分析結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.3.2 樣品處理和測定
稱取100.0g白酒試樣于250mL燒杯中,用40g/L氫氧化鈉溶液調(diào)至堿性,置于水浴鍋上,將白酒樣品揮發(fā)至干,用10mL蒸餾水分3次將殘留物轉(zhuǎn)移至25mL帶塞比色管中,搖勻,置于冰浴中。其余過程同標(biāo)準(zhǔn)溶液處理方法。
1.4 色譜圖
在選定的色譜條件下環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的色譜圖。
2. 結(jié)果與討論
2.1 樣品處理可行性分析
甜蜜素(環(huán)己基氨基磺酸鈉)對光、熱穩(wěn)定,因此水浴加熱不會對其造成影響。白酒中可能存在對甜蜜素測定造成影響的醇酯類物質(zhì)如環(huán)己醇等,在蒸干過程中將揮發(fā)掉,不會對測定結(jié)果造成影響。
2.2 色譜峰校準(zhǔn)方法
衍生處理后在毛細(xì)管柱上會出現(xiàn)兩個峰,前面的峰較大是環(huán)己醇亞硝酸酯峰,后面的峰較小,是環(huán)己醇峰,但隨著時間推移,前面的峰逐漸變小,后面的峰逐漸變大,若用一個峰校準(zhǔn)則結(jié)果誤差較大。通過對兩個峰面積的變化趨勢進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),單個峰的面積是不斷變化的,而兩個峰面積之和基本處于平衡,因此選擇兩個峰面積之和進(jìn)行定量,結(jié)果更
加準(zhǔn)確可靠。儀器工作站中有峰面積加和定量的功能,計算方便快捷。
2.3 工作曲線
對1.3.1中的系列環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定,以環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度X(g/L)為橫坐標(biāo),以色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示,在0.02~0.40g/L濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,線性方程為Y=1565.32X–2.27,線性相關(guān)系數(shù)r=0.9998。
2.4 方法檢出限
在國標(biāo)方法的基礎(chǔ)上,通過以下措施降低方法的檢出限:(1)用毛細(xì)管色譜柱代替填充柱,穩(wěn)定性和靈敏度都明顯提高;(2)在樣品處理過程中,采用增大樣品量進(jìn)行蒸干濃縮的方式;(3)在衍生過程中減少加水量及衍生試劑的加入量;(4)將萃取過程正己烷的加入量減半,相當(dāng)于增大濃縮倍數(shù),經(jīng)回收試驗驗證符合要求。以3倍信噪比計算儀器的檢出限為2mg/L,經(jīng)換算,方法的檢出限為0.1mg/kg,與SN/T1948–2007液質(zhì)方法檢出限(0.10mg/kg)相吻合,證明該方法可以用于白酒中甜蜜素的檢測。
2.5 回收試驗
分別選取3種不同香型陰性白酒樣品,進(jìn)行加標(biāo)回收試驗,測定結(jié)果及回收率計算結(jié)果見表2。由表2可知,不同香型白酒中甜蜜素回收率沒有明顯差別,在88%~96%之間。
2.6 比對試驗
為驗證該方法測定白酒中甜蜜素含量的準(zhǔn)確性,選取6個陽性白酒樣品,分別用氣相色譜法與液相色譜–質(zhì)譜法進(jìn)行比對試驗,結(jié)果見表3。由于液相色譜–質(zhì)譜法測定白酒中的甜蜜素是通過基質(zhì)匹配繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,排除了白酒基質(zhì)的干擾,濾膜過濾之后進(jìn)行測定,不存在較大的損失,測定結(jié)果準(zhǔn)確度高;氣相色譜法測定的結(jié)果相對于液質(zhì)法略低,原因是由于氣相色譜法樣品前處理中衍生過程和萃取過程都比較復(fù)雜,會對測定結(jié)果造成一定的影響,但兩種方法測定結(jié)果的相對偏差為3.3%~8.3%,在誤差允許范圍之內(nèi)。
3. 總結(jié)
山東譜析儀器建立了用毛細(xì)管色譜柱氣相色譜法測定白酒中甜蜜素含量的方法,在樣品前處理過程中通過增大樣品量、水浴蒸干濃縮、適當(dāng)減少衍生試劑用量和最終溶劑萃取體積,增大了樣品濃縮倍數(shù),大大降低了方法檢出限,方法的精密度、準(zhǔn)確度和回收率均符合檢測要求。該方法與液質(zhì)連用法相比運行成本低,易于推廣。